Описание
Набор для очистки BigDye XTerminator® — это быстрый и простой способ очистки реакций секвенирования ДНК, который удаляет некорпорированные терминаторы и соли BigDye®. Больше никаких красителей! Очистка завершена менее чем за 40 минут и требует менее 10 минут работы.
• Устранить передачу жидкости. Используйте одну пластину.
• Получите полное удаление красителя.
• Стабилизируйте образцы перед анализом.
• Улучшите рабочий процесс последовательности.
• Выполнять ручные или автоматизированные протоколы.
• Получайте быстрые, надежные и воспроизводимые результаты.
Простой процесс очистки
Традиционные способы очистки, такие как осаждение этанолом, требуют добавления нескольких реагентов наряду с этапами декантирования и центрифугирования. Набор для очистки BigDye XTerminator® требует добавления только двух реагентов, которые можно добавлять последовательно или предварительно
смешивать :
• XTerminator ™ Solution — очищает неинкорпорированные красители и свободные соли от реакции после секвенирования.
• Решение SAM ™ — повышает производительность раствора XTerminator ™ и стабилизирует реакции после очистки.
Протокол очень прост (см. Рисунок 1):
1. Выполните последовательность циклов с помощью терминаторов BigDye®.
2. После циклического секвенирования кратковременно центрифугируйте реакционную пластинку и затем пипетируйте правильный объем раствора SAM ™ в каждую лунку.
3. Внесите правильный объем раствора XTerminator ™ в каждую лунку:
4. Кратковременно перемешайте контейнер Vortex XTerminator ™ Solution.
5. Используя наконечник пипетки с широким отверстием (рекомендуемые наконечники с широким отверстием), аккумулируйте правильный объем жидкости в каждую пластинчатую лунку.
6. Уплотните пластину с помощью теплового уплотнения или прозрачной клейкой пленки (P/N 4306311). Вихрь в течение 30 минут (рекомендуемые 96-луночные микропланшетные вихремеры и 384-луночные микроволновые вихри), затем кратковременно центрифугируют реакционную пластинку.
7. Поместите реакционную пластинку в анализатор ДНК Applied Biosystems. Выберите модуль запуска и панель запуска.
Отличное восстановление с длинными фрагментами
Вы не будете жертвовать длиной последовательности при использовании набора для очистки BigDye XTerminator®. На рисунке 2 показаны данные из Технологического подразделения ДНК, Института биотехнологии растений (NRC-PBI), Саскатун, Канада. База Q20 читается = 1044 bp.
Улучшенное восстановление коротких фрагментов
Используйте комплект для очистки BigDye XTerminator® для получения более качественных данных. На рисунке 3 показано сравнение между комплектом очистки BigDye XTerminator® и очисткой на основе осаждения этанолом, выполненной в Технологическом подразделении ДНК, Институте биотехнологии растений (NRC-PBI) в Саскатуне, Канада. Набор для очистки BigDye XTerminator® обеспечивает превосходное восстановление коротких фрагментов. Очистка этанолом приводит к получению данных о последовательности, омраченных красителями.
Повышенная стабильность
Герметичные реакционные пластины стабильны в течение 48 часов при комнатной температуре или 10 дней при 4 ° C. Вы можете повторно запустить один и тот же образец в случае прерывания питания, неисправности компьютера и т. Д. Без повторения эксперимента. Это повышает гибкость при загрузке реакционной плиты на приборе CE.
Доступные прикладные системы Biosystems предоставляют загружаемые модули для работы с использованием набора для очистки BigDye XTerminator® и программного обеспечения для сбора данных. Эти модули предназначены для 3100, 3100-Avant (с Data Collection v2.0 или выше), анализаторов 3130/3130xl и 3730/3730xl.
