Описание
CellEvent ™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent — новый флюорогенный субстрат для активированной каспазы-3/7, который совместим как с живыми клетками, так и с фиксированной картиной с максимумами поглощения / излучения ~ 502/530 нм. Активация каспазы-3 является важным событием во время апоптоза, что делает его оптимизированным реагентом для анализа апоптотических клеток.
• Оптимизированный субстрат каспазы-3/7 для анализа апоптоза.
• Простота использования — добавление и чтение; не требуется лизис клеток
• Использование для измерения времени; легко выбрать интересующий момент времени.
• Совместимость с методами фиксации флуоресценции в реальном времени и на основе формальдегида
• Мультиплекс включается с другими флуоресцентными реагентами для подтверждения апоптоза в той же популяции клеток или клеток.
Специфичность субстрата.
CellEvent Caspase-3/7. Зеленый детектор. Реагент представляет собой четырех аминокислотный пептид (DEVD), конъюгированный с нуклеиновой кислотой, связывающей краситель с поглощением / максимумы излучения ~ 502/530 нм. Пептидная последовательность DEVD представляет собой сайт расщепления для каспазы-3/7, а конъюгированный краситель не флуоресцирует до расщепления от пептида и связан с ДНК.
Принципы действия
CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Реагент по своей природе не флуоресцентен, поскольку пептид DEVD ингибирует способность красителя связываться с ДНК. Однако после активации каспазы-3/7 в апоптотических клетках пептид DEVD расщепляется, что позволяет красителю связываться с ДНК и продуцировать яркий флуорогенный ответ. Флуоресцентная эмиссия красителя при связывании с ДНК составляет ~ 530 нм и может наблюдаться с использованием стандартного набора фильтров FITC.
Простой трехступенчатый протокол.
Чтобы использовать реагент обнаружения CellEvent Caspase 3/7, просто добавьте его в клетки, инкубируйте 30 минут и визуализируйте (см. Рисунок). Апоптотические клетки с активированной каспазой-3/7 будут иметь ярко-зеленые ядра, а клетки без активированной каспазы 3/7 будут иметь минимальный флуоресцентный сигнал.
Универсальность анализа позволяет обнаруживать и фиксировать живые клетки
Этот надежный анализ позволяет исследовать активацию каспазы-3/7 в живых клетках. Кроме того, поскольку этапы промывки не нужны для обнаружения, сохраняются хрупкие апоптотические клетки, обычно теряемые во время стирок. Важно отметить, что флуоресцентный сигнал от CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent может выдержать фиксацию и пермеабилизацию. Это позволяет гибко выполнять анализы конечных точек и зондировать другие интересующие белки с использованием иммуноцитохимии.
