Описание
Thermo Scientific HisPur Ni-NTA Superflow Agarose представляет собой модифицированную Nitrilotriacetic acid (NTA) подложку Superflow 6, заряженную двухвалентным никелем (Ni + 2 ), предназначенную для очистки FPLC полигистидиновых меченых белков.
Особенности HisPur Ni-NTA Superflow Agarose:
• Высокая производительность — превышает 20 мг His-tagged GFP на мл смолы при линейной скорости потока 300 см / час.
• Высокая чистота — обеспечивает чистоту фракций с элюированием более 80% при использовании для очистки от лизатов.
• Универсальный — можно использовать для очистки белков в естественных и денатурирующих условиях.
• Прочные высокосшитые шарики допускают линейную скорость потока до 1200 см / час
• Совместимый — поддерживает функцию в самых разных химикатах и условиях pH.
• Экономичность — конкурентоспособная по цене смола стабильна с помощью нескольких циклов очистки и повторного использования
HisPur Ni-NTA Superflow Agarose представляет собой сильно сшитую, прочную смолу, которая не сжимается при скорости потока, используемой для среднесрочных или крупномасштабных FPLC-очистки. Смола хорошо подходит для различных химических веществ и значений рН и совместима с обычными процедурами на месте. По сравнению с кобальтом и другими лигандами, используемыми для иммобилизованной аффинной хроматографии на металле (IMAC), никель обеспечивает большую емкость для очистки His-меченых белков. HisPur Ni-NTA Superflow Agarose демонстрирует высокую динамическую связывающую способность в диапазоне скоростей потока, что делает его отличным выбором для более крупномасштабных очищений.
Применение:
• Среднесрочная и крупномасштабная очистка FPLC полигистидиновых меченых белков
Аффинная хроматография часто используется в качестве быстрого и легкого подхода для очистки рекомбинантных белков. Один из таких способов очистки включает связывание полигистидиновой метки с катионным двухвалентным металлом, координируемым хелатором, иммобилизованным на подложке из бисера. Для очистки иммобилизованной аффинной хроматографии (IMAC) His-меченых белков тип шариков, хелаторов и иммобилизованных металлов влияет на чистоту, выход и скорость потока этих очищений.
HisPur Ni-NTA Superflow Agarose представляет собой модифицированную NTI-модификацию Superflow 6 с нитрилотриуксусной кислотой (NTA), заряженную двухвалентным никелем (Ni + 2), предназначенную для очистки FPLC белка с полигистидином. Чтобы продемонстрировать работоспособность, 6xHis-GFP был экспрессирован в 100-литровом реакторе и масса клеток была собрана в несколько фракций. Часть биомассы (240 г) лизировали 2 л буфера для лизиса, дополненного ингибитором Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor (Part No. 78439). Лизат очищали и разделяли на две фракции. Затем целевой белок очищали с использованием HisPur Ni-NTA Superflow Agarose и смолы ведущего конкурента в эквивалентных 200 мл упакованных гранулах. Общий выход, восстановление и чистота (> 80%) были почти одинаковыми для обеих смол, и более 4 г целевого белка очищали менее чем за 3 часа.
